& Don Diego López Pacheco, hijo primogénito de don Juan Pacheco y de doña María Portocarrero, heredero del I Mayorazgo, fue II Duque de Escalona, II Marqués de Villena, Pretenso Maestre de Santiago y Capitán General en la Guerra de Granada.

Después de la toma de Granada, los Reyes Católicos por Privilegio Real de 4 de Diciembre de 1491 le hicieron merced de las Villas y Tierras de Serón y Tíjola, cesando en el título de Marqués de Villena que fue absorbido por los Reyes Católicos.
A pesar de las diligencias de don Diego López Pacheco para que el título nobiliario revertiera a la familia, los Reyes Católicos no accedieron a tal restitución. No obstante, los Señores de este linaje continuaron utilizando entre sus títulos el de Marqués de Villena.

Ÿ Don Diego López Pacheco se casó en primeras nupcias, en el reinado de Enrique IV, con doña María de Luna, Condesa de San Esteban de Gormaz. Del matrimonio nació don Juan Pacheco de Luna, III Conde de Santisteban. Aunque murió sin sucesión, el Condado de Santisteban quedó incorporado al linaje Pacheco.

Ÿ El segundo matrimonio de don Diego López Pacheco, en el reinado de los Reyes Católicos, fue con doña Juana Enríquez - hija de don Alonso Enríquez, Conde de Melgar y III Almirante de Castilla, y de María de Velasco. Como merced por el casamiento, los Reyes Católicos les confirmaron el Señorío de Escalona, ratificando el título de Duques de Escalona.

Del segundo matrimonio nacieron los hijos: Diego López Pacheco, Isabel Pacheco y Magdalena Pacheco.

El matrimonio don Diego López Pacheco y doña Juana Enríquez fue enterrado en el Monasterio de El Parral de Segovia.
El cuerpo de don Diego López, como el de sus antepasados, reside en el Monasterio de El Parral, junto a la primera grada del Altar Mayor, en una lámina de bronce se lee: <<Aquí yace sepultado don Diego Pacheco, Duque de Escalona, Marqués de Villena, Conde de Santisteban, Mayordomo Mayor de la Corona de Castilla, pecador y muy errado, que murió pidiendo a Dios misericordia: año del Señor de 1529 años en seys de Noviembre>>.
En una lámina de bronce, en la sepultura de doña Juana Enríquez se lee: <<Aquí yaze sepultada doña Juana Enríquez, Duquesa de Escalona, Marquesa de Villena, Condesa de Santisteban, que vivió en mucha conformidad con su marido y fue exemplo y hazaña de buenas mujeres: murió año del Señor 1530, a veynte y seis del mes de abril>>.

Diego López I, II Marqués de Villena, fundó los conventos de la Concepción Francisca de Ayllón y Escalona, gravando a sus sucesores don los gastos del capítulo de la provincia franciscana de Castilla, ostentando el Patronato General de la Orden Franciscana para España.